
【简答题】若配制500m1PDA斜面培养基,其配方和配制过程如何?A.128.1℃ B.121℃ C.100℃
配制500mL PDA斜面培养基需遵循经典配方比例缩减原则,核心成分为马铃薯浸出液、葡萄糖和琼脂,灭菌关键温度为121℃。以下是具体方案:
| 成分 | 用量 | 作用说明 |
|---|---|---|
| 马铃薯(去皮) | 100g | 提供天然营养物质(如氨基酸、维生素) |
| 葡萄糖 | 10g | 碳源,促进真菌生长 |
| 琼脂 | 7.5-10g | 凝固剂,形成固体培养基结构 |
| 蒸馏水 | 500mL | 溶剂,维持体系稳定 |
| pH值 | 自然 | 无需调整,适合真菌生长(约5.6-6.0) |
称量与预处理:将100g马铃薯去皮、切块(1cm³左右),置于烧杯中,加入500mL蒸馏水。
熬煮与过滤:加热至沸腾后维持20-30分钟(马铃薯变软可戳破),用2-8层纱布趁热过滤,弃去滤渣,保留滤液。
定容:将滤液补加蒸馏水至500mL,确保体积准确。
添加成分:将滤液倒入锅中,加入10g葡萄糖和7.5-10g琼脂(提前捣碎加速溶解),小火加热并持续搅拌,避免琼脂糊底或溢出。
分装试管:待琼脂完全溶解后,趁热用漏斗分装至试管,每管装入量约为试管高度的1/5(约5-10mL,视试管大小调整),避免沾污管口。
加塞包扎:试管口塞棉塞(深入管内3cm,松紧适度),外包牛皮纸或纱布,标记名称和日期。
高压灭菌:将试管放入高压灭菌锅,121℃灭菌20-30分钟(15磅压力)。
摆斜面:灭菌后趁热取出试管,倾斜放置(斜面长度约为试管长度的2/3),待冷却凝固(约30分钟)后即成斜面。
灭菌温度选择:题目选项中**B.121℃**为正确灭菌温度,此条件可有效杀灭培养基中的微生物孢子,同时避免营养成分破坏。
琼脂溶解:需小火持续搅拌,确保完全溶解后再分装,未溶解的琼脂会导致培养基凝固不均匀。
无菌操作:分装时避免培养基接触管口,灭菌后摆斜面需在无菌环境(如超净台)中进行,防止污染。
斜面质量检查:凝固后斜面应平整无气泡,37℃空白培养48小时无杂菌生长方可使用。
PDA斜面培养基通过天然马铃薯浸出液提供营养,121℃高压灭菌是保证无菌的核心步骤。其配制过程需严格控制熬煮时间、琼脂溶解状态及灭菌参数,最终形成的斜面可用于真菌菌种的培养与保藏。你是否在实际操作中遇到过琼脂凝固过快或灭菌后污染的问题?