CRISPR/Cas9是应用最广泛的基因组编辑技术，其操作过程如下:①人工合成的短链RNA作为向导（简称gRNA），它将部分与细胞某目的基因中希望被编辑的序列相结合;②来自细菌的核酸酶Cas9与gRN

CRISPR/Cas9是应用最广泛的基因组编辑技术，其操作过程如下:①人工合成的短链RNA作为向导（简称gRNA），它将部分与细胞某目的基因中希望被编辑的序列相结合;②来自细菌的核酸酶Cas9与gRNA结合，切割与gRNA结合的DNA，使DNA双链断裂;③加入大量用于修复的模板DNA（即大部分序列与被切割位点附近序列相同，个别位点被人工改变）。这样，细胞启动修复机制，人类希望改变的碱基序列被引入基因组中，基因组的准确编辑由此实现。以下关于该技术叙述正确的是（） A. gRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含6种核苷酸 B. Cas9经内质网、高尔基体加工才具有切断DNA的活性 C. RISPR/Cas9技术对不同基因进行编辑时，应使用相同的gRNA D. CRISPR/Cas9技术可改变基因结构，也可以使某个基因失去功能

让我们逐个分析选项：

A. gRNA 的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含 6 种核苷酸

这里说“结合区域”指的是 gRNA 中与 DNA 配对的区域，而 gRNA 是 RNA，DNA 是脱氧核苷酸，但配对时是 A-U、T-A、G-C、C-G 这样的配对。DNA 中碱基种类是 A、T、C、G（4 种脱氧核苷酸），RNA 中碱基种类是 A、U、C、G（4 种核糖核苷酸），两者结合时涉及的碱基种类最多仍是 4 种（A、T/U、C、G）。题干说“最多含 6 种核苷酸”显然不对，因为核苷酸类型最多涉及 4 种碱基（DNA 链上 4 种，RNA 链上 4 种，但配对部分双方加在一起也不到 6 种不同的核苷酸类型）。但如果“核苷酸”指化学单体类型，则 DNA 有 4 种 dNTP，RNA 有 4 种 NTP，是 8 种。无论如何，“6 种核苷酸”这个说法没有依据。结合区域在 DNA 链上的部分只有 4 种脱氧核苷酸，在 RNA 链上的部分只有 4 种核糖核苷酸，混合起来是 8 种化学单体，因此这里“最多含 6 种核苷酸”应该是错误的。另外题干说“部分结合”是指 gRNA 的序列与 DNA 互补配对区域长度约 20 bp，所含碱基种类通常 4 种都有，但结合区域指整体，而不是碱基种类数 6，所以表述可疑。更关键的是，DNA 只有 4 种碱基，RNA 与它配对时，涉及的碱基种类一共就是 4 种配对组合，不是 6 种。所以 A 错。

B. Cas9 经内质网、高尔基体加工才具有切断 DNA 的活性

Cas9 蛋白在原核细胞（细菌）中就有活性，在原核细胞中不需要经过真核细胞的内质网和高尔基体加工。若在真核细胞中表达 Cas9，它作为细胞质蛋白（虽然有核定位信号入核），一般也不需要糖基化等在内质网、高尔基体的加工来获得切断 DNA 的活性。它的活性依赖自身正确折叠，可能在细胞质中由核糖体合成后折叠即可。所以“必须经过内质网、高尔基体加工”是错误的。

C. CRISPR/Cas9 技术对不同基因进行编辑时，应使用相同的 gRNA

显然错误，因为 gRNA 是根据要编辑的基因的靶序列设计的，不同基因靶序列不同，gRNA 就要不同。

D. CRISPR/Cas9 技术可改变基因结构，也可以使某个基因失去功能

正确。通过切割 DNA 双链，细胞修复时如果用提供的模板进行同源重组（HDR），可以精确改变碱基序列（改变基因结构）；如果不用模板，依赖易错的 NHEJ 修复，可能造成插入或缺失突变，使基因失去功能。

所以正确选项是 D。

答案：D ✅